實時熒光定量PCR技術(shù)(Real-time Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入可與DNA產(chǎn)物特異性結(jié)合的熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最終通過相對定量或絕對定量的方法確定各個樣本的本底表達(dá)量。微生物QPCR可用于快速、準(zhǔn)確地測定目標(biāo)微生物數(shù)量。
真核生物常見內(nèi)參:18S rRNA、β-actin、GAPDH、EF-1α等;原核生物:16S rRNA、gyrB等。如果無法確定內(nèi)參,建議參考文獻(xiàn),或者做內(nèi)參篩選實驗。
引物和探針的選擇需要考慮到目標(biāo)微生物的特異性和保守性??梢允褂霉_可獲得的微生物基因數(shù)據(jù)庫,如NCBI,進(jìn)行引物和探針設(shè)計。此外,確保引物和探針的互補性和避免引物之間的重疊和相互作用也很重要。
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